Имунно-ферментный анализ (ИФА)
Метод иммуноферментного анализа (ИФА) был предложен в начале 70-х годов тремя группами исследователей: Engvall и Perlmann в Швеции, van Weemen и Schuur в Нидерландах и Rubenstein с сотр. в США. К концу XX века этот метод прошел путь от новейшей научной разработки до рутинного метода в клинической диагностике.
В настоящее время ИФА – диагностика является наиболее часто используемым иммунологическим методом в городских и районных больницах, поликлиниках, роддомах, учреждениях санэпиднадзора и других медучреждениях.
Сущность ИФА заключается в специфическом взаимодействии антитела и антигена с последующим присоединением к полученному комплексу коньюгата (антивидового иммуноглобулина, меченного ферментом). Фермент вызывает разложение хромогенного субстрата с образованием окрашенного продукта, который выявляется либо визуально, либо фотометрически. Регистрацию результатов реакции проводят на специальных фотометрах с вертикальным лучом при определенной длине волны. Результат выражают в единицах оптической плотности.
Иммуноферментный анализ по сравнению с другими методами выявления антигенов и антител обладает следующим преимуществом: высокой чувствительностью, позволяющей выявлять концентрации до 0,05 нг/мл.
ГОРМОНЫ ЩИТОВИДНОЙ ЖЕЛЕЗЫ
В настоящее время в России до 70% пациентов с эндокринологическими патологиями имеют заболевания щитовидной железы. При этом такие заболевания, как диффузный и диффузно – узловой эндемический зоб и тиреоидные опухоли часто связаны с наличием йодной недостаточности. Дефицит йода и развивающийся дефицит тиреоидных гормонов вызывают снижение индекса интеллекта у потомства.
ТИРЕОТРОПНЫЙ ГОРМОН (ТТГ)
Тиреотропный гормон (ТТГ) – это гипофизарный гормон, который воздействуя на щитовидную железу , играет основную роль в обеспечении нормального уровня циркуляций йодтиронинов, T3 и T4. Уровень ТТГ находиться в обратной зависимости от концентраций Т3 и Т4, а также контролируется гипоталамическим гормоном ТРГ (тиреотропин – рилизинг гормон).
При первичном гипотиреозе, когда снижена выработка тиреоидных гормонов, уровень ТТГ обычно сохраняется высоким. С другой стороны, при вторичном и третичном гипотиреозе, когда снижение выработки тиреоидных гормонов обусловлено нарушением функций гипофиза и гипоталамуса, уровень ТТГ обычно низок. При гипертиреозе уровень ТТГ обычно снижен до субнормальных значений. Реже такое снижение уровня ТТГ может наблюдаться при гиперстимуляции щитовидной железы вследствие гипоталамических или гипофизарных нарушений, хотя обычно в этом случае уровень ТТГ повышен.
Измерение циркулирующего ТТГ используется как первичный тест для дифференциальной диагностики гипотиреоидных состояний и как помощь в мониторинге адекватности гормонозаместительной терапии.
СВОБОДНЫЙ ТРИЙОДТИРОНИН (сТ3)
Только около 0,03% трийодтиронина циркулирует в крови в свободной, то есть несвязанной в белком – носителем, форме. Свободный Т3 находится в динамическом равновесии с гормоном, связанным на белках носителях (ТСГ) альбумином и преальбумином. Однако, физиологически активным гормоном является исключительно свободная фракция трийодтиронина.
Концентрация с Т3 удерживается в равновесии механизмами регуляции гипоталамо – гипофизарно – тироидной системы и буферными возможностями связывания ТОГ, альбумина и преальбумина. Поэтому концентрация с Т3 в противоположность связанному трийодтиронину не зависит от содержания ТСГ.
Измерение свободного трийодтиронина является объективным критерием оценки функции щитовидной железы даже у пациентов с измененной способностью белкового связывания тироидных гормонов, как например, во время беременности.
СВОБОДНЫЙ ТИРОКСИН ( сТ4)
Циркулирующий главный гормон щитовидной железы тироксин (Т4) почти весь связан с транспортными белками, основным из которых является тироксин – связывающий глобулин (ТСГ), причем между ними поддерживается равновесие таким образом, что изменение уровня транспортных белков вызывает соответствующее изменение уровня общего Т4, тогда как уровень свободного Т4 остается сравнительно неизменным. Следовательно, можно ожидать, что концентрация свободного Т4 будет более точно соответствовать клиническому тиреоидному статусу, нежели концентрация общего Т4, поскольку выходящие за пределы нормы результаты общего Т4 могут отражать как нарушение функций щитовидной железы, так и просто изменение (физиологическое или патологическое) уровня транспортных белков. Так, например, подъем ТСГ типичен при беременности, пероральные контрацептивы и эстрогентерапия вызывают подъем уровня общего Т4, часто выше пределов нормы, не вызывая при этом соответствующего подъема уровня свободного Т4.Кроме того, изменения уровня ТСГ могут иногда скрывать нарушения функции щитовидной железы, поднимая уровень общего Т4 у пациентов с гипотиреозом или снижая его у больных с гипертиреозом до нормальных значений. И в этих случаях концентрация свободного Т4 также будет более точно отражать истинный тиреоидный статус, чем концентрация общего Т4.
АНТИТЕЛА К ТИРЕОГЛОБУЛИНУ (АТ к ТГ)
Аутоантитела к тиреоглобулину (АТ к ТГ) с помощью чувствительных иммуноанализаторов определяются в низких концентрациях в сыворотке 4-27% здоровых людей; в более высоких концентрациях они определяются у 51% пациентов с болезнью Грейвса и у 97% с тиреоидитом Хашимото, а так же у 15-30%пациентов с дифференцированной карциномой щитовидной железы. Измерение АТ к ТГ давно уже используются в сочетании с определением антител к тиреоидной пероксидазе (АТ к ТПО), помогая в диагностике аутоиммунных заболеваний щитовидной железы. Вполне вероятно, что анализ АТ к ТПО в качестве основного теста при аутоиммунных заболеваниях щитовидной железы заменит собой комбинацию АТ к ТГ / АТ к ТПО благодаря более высокой чувствительности теста АТ к ТПО при болезни Грейвса и тиреоидите Хашимото. Поскольку аутоантитела к тиреоглобулину могут вмешиваться как в иммуноанализ, основанный на конкурентном связывании, так и в иммунометрический анализ ТГ, всем пациентам следует выполнить чувствительный иммуноанализ АТ к ТГ для исключения их влияний.
Измерения АТ к ТГ могут также дать полезную прогностическую информацию у пациентов, подвергающихся операционному лечению дифференцированной карциномы щитовидной железы. Если у пациента изменились АТ к ТГ, в послеоперационном периоде уровень АТ к ТГ в сыворотке будет оставаться постоянным или нарастать при персистировании или прогрессировании опухоли, тогда как у пациентов, признанных после длительного наблюдения практически излечившимися, уровни АТ к ТГ в целом понижаются
АНТИТЕЛА К ТИРЕОИДНОЙ ПЕРОКСИДАЗЕ ( АТ к ТПО)
АТ к ТПО являются аутоантителами к этому ферменту. Фермент ТПО катализирует процесс йодирования тирозина в тиреоглобулине в процессе биосинтеза Т3 и Т4. До недавнего времени эти антитела именовались антимикросомальными, поскольку они связывались с микросомальной частью тиреоцитов. Современные исследования определили, что ТПО является основным антигенным компонентом микросомов.
Аутоиммунные заболевания щитовидной железы являются основным фактором, лежащим в основе гипотиреоза и гипертиреоза, и развиваются обычно у генетически предрасположенного населения. Таким образом, измерение циркулирующих антитериоидных антител является маркером генетической предрасположенности. Наличие АТ к ТПО и повышенный уровень ТТГ позволяют прогнозировать развитие гипотиреоза в будущем.
Основными аутоиммунными заболеваниями щитовидной железы являются тиреоидит Хашимото и болезнь Грейвса. Фактически во всех случаях болезни Хасимото и в большинстве случаев болезни Грейвса повышены АТ к ТПО. Высокие уровни АТ к ТПО в сочетании с клиническими проявлениями гипотиреоза подтверждают диагноз болезни Хасимото.